El equipo de I+D de Alchilife, en colaboración con Mario Romano, MD, es uno de los primeros laboratorios que validó un método de contacto directo para el ensayo de citotoxicidad realizado de acuerdo con la norma ISO 10993-5 sobre perfluorocarbonos (PFCL) para cirugía oftálmica.

La selección de un método verdaderamente confiable para la evaluación de la citotoxicidad de los PFLC es la estrategia clave para evitar serias preocupaciones sobre la seguridad de los pacientes. El pasado desafortunado ha demostrado que el método de «dilución de extracto», a pesar de ser mencionado entre las pruebas aceptables por la norma ISO 10993-5, no es un ensayo confiable para productos sanitarios que contienen sustancias volátiles. Por el contrario, la prueba de contacto directo, que siempre ha sido el método de elección utilizado en los laboratorios de Alchilife, es altamente sensible, capaz de detectar incluso una citotoxicidad baja, y está ganando un mayor interés en el campo de la seguridad de los PFCL.

Al explotar las propiedades de alta densidad de los PFCL liquidos, el equipo de investigadores de Alchilife pudo garantizar el contacto directo efectivo entre el perfluorocarbono y el sustrato celular (es decir la capa celular ARPE-19 y BALB 3T3) durante toda la duración de la prueba al inyectar cuidadosamente el perfluorocarbono con la punta de la pipeta sumergida en el medio justo encima de las líneas celulares: esto crea una sola burbuja densa que se deposita suavemente en las células debido a la fuerza de la gravedad, evitando al mismo tiempo una presión excesiva en la capa celular debido al peso de la muestra. Este paso simula lo que sucede en el ojo durante el uso clínico. La burbuja densa así formada evita cualquier evaporación de muestra o pérdida de contacto del PFCL con las células. Este método permite superar el problema de la insolubilidad del PFCL en agua que evita que la muestra se diluya en el medio, y este último puede ser uno de los factores que perjudican la confiabilidad del método de extracción para probar la citotoxicidad del PFCL.

Con el enfoque de Alchilife se pueden probar con éxito varias cantidades de áreas de contacto y tiempos de contacto (hasta 24 horas). Como resultado de este estudio, cuyos resultados preliminares fueron presentados por el Dr. Romano en el 18 ° Congreso Euretina en Viena, la prueba de citotoxicidad por contacto directo de los perfluorocarbonos, que garantiza cubrir el 59% de las áreas de superficie celular durante 24 h de tiempo de contacto según la norma ISO 10993-5 fue validada cuantitativa y cualitativamente en líneas celulares ARPE19 y BALB 3T3.

Referencias:

  • ISO 10993-5, 2009. Biological evaluation of medical devices – Part 5: Tests for in vitro cytotoxicity.
    https://www.iso.org/obp/ui/#iso:std:iso:10993:-5:en (accessed 20 July 2019)
  • Li et al. Study on the in vitro cytotoxicity testing of medical devices(Review). Biomed Rep 2015;3(5):617-620.
  • Srivastava GK et al. Comparison between direct contact and extract exposure methods for PFO cytotoxity evaluation. Sci Rep 2018;8(1):1425.
  • Romano M. Perfluorocarbons for intraocular use: cytotoxicity test validation according to the ISO 10993-5. Presentation at Euretina 2018
  • Romano MR et al. Evaluation of Cytotoxicity of Perfluorocarbons for Intraocular Use by Cytotoxicity Test In Vitro in Cell Lines and Human Donor Retina Ex Vivo. Transl Vis Sci Technol 2019; 8(5):24.