È noto che il trapianto di cornea è ancora associato a un certo – sebbene piuttosto basso – rischio di infezione post-operatoria che può rappresentare una seria minaccia per il paziente trapiantato. Poiché una delle possibili cause comprende l’innesto di tessuto donatore contaminato, le banche degli occhi hanno la responsabilità di accertare che per il trapianto siano distribuite solo le cornee prive di contaminazione.

Con questo obiettivo, i laboratori di Ricerca e Sviluppo Alchilife stanno collaborando con la Banca degli Occhi di Monza per selezionare e convalidare un sistema per confermare la sterilità delle cornee testando tutti i medium utilizzati per preservare e trasportare i tessuti dei donatori.

Come sappiamo, la maggior parte delle banche degli occhi europee conserva le cornee dei donatori in medium di coltura a 31°C che consente di preservare i tessuti espiantati fino a un massimo di 4 settimane. Questo tempo di conservazione più lungo offre agli operatori delle banche degli occhi la possibilità di eseguire test accurati sui tessuti donati con maggiore facilità.

I medium per la conservazione corneale disponibili sul mercato contengono una miscela di agenti antimicrobici. Da un lato questi agenti aiutano a minimizzare la contaminazione nelle cornee conservate, ma dall’altro possono impedire la crescita di alcuni microrganismi la cui presenza potrebbe non essere rivelata durante l’analisi microbiologica e, di conseguenza, potrebbero essere trasferiti al paziente trapiantato.

Questo è il motivo per cui il “Test di idoneità al metodo” della Farmacopea Europea (EP) raccomanda di rimuovere tutti i fattori che possono interferire con la crescita microbica prima del test microbiologico.

La stessa Banca degli Occhi di Monza era solita eseguire i test microbiologici utilizzando il sistema automatico BACTEC™ (Becton Dickinson), nel quale i campioni dei medium di conservazione vengono testati utilizzando specifici flaconi BACTEC™ contenenti resine che dovrebbero trattenere eventuali residui di antimicrobici. Nonostante l’uso di un sistema automatico, è stato dimostrato che a volte i risultati ottenuti possono essere fuorvianti.

Per evitare risultati falsamente negativi, il nuovo metodo studiato prevede una fase aggiuntiva in cui tutti i medium sono trattati prima del test con un dispositivo medico brevettato simile a una siringa, marcato CE, RESEP (Alchimia Srl), contenente una speciale miscela di resine per l’eliminazione totale degli antimicrobici dal medium di conservazione corneale.

Questo metodo è stato convalidato utilizzando sia campioni dei medium di organo-coltura (Tissue-C, Alchimia Srl) sia campioni del medium per la deturgescenza/trasporto (Carry-C, Alchimia Srl) inoculati con vari ceppi microbici indicati dalla Farmacopea Europea prima del trasferimento nelle bottiglie BACTEC™ per l’analisi automatica. Naturalmente, sono stati anche usati controlli negativi (cioè campioni senza ceppi microbici) e controlli positivi (cioè campioni con ceppi microbici).

I risultati ottenuti hanno mostrato che l’uso di RESEP ha aumentato la sensibilità del test di sterilità del sistema automatizzato BACTEC™ fino al 100% e, di conseguenza, ha consentito la convalida del metodo del test di sterilità dei medium per la conservazione corneale e per la deturgescenza/trasporto secondo i requisiti della Farmacopea Europea.

Riferimenti:

  • Vignola R. et al. Validation of the BD BACTEC™ method for sterility testing of corneal preservation media according to the European Pharmacopoeia (chapter 2.6.1.). Presentations at the European Association of Tissue Banks EATB 2017 and 2018
  • Vignola et al. A two-centre validation study of sterility test of corneal storage media with elimination of interfering antimicrobials in compliance with the European Pharmacopoeia. Cell Tissue Bank 2019 https://doi.org/10.1007/s10561-019-09766-7
  • Council of Europe (2013a) Sterility test. In: European Directorate For The Quality of Medicines and Healthcare (ed) European Pharmacopoeia, Eight edn, Vol I, Strasbourg Cedex, France, pp 175–178
  • Schroeter J. et al. Validation of the microbiological testing of tissue preparations using the BACTECTM blood culture system. Transfus Med Hemother 2012;39(6):387–390
  • Mistò R. et al. Method for sterility testing of corneal storage and transport media after removal of interfering antimicrobials: prospective validation study in compliance with the European Pharmacopoeia. BMJ Open Ophthalmol 2017;2(1): e000093.